1儀器及試藥2695HPLC儀,、2487紫外檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；LC-20ATHPLC儀,、SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器（DAD）均系日本島津公司產(chǎn)品,。

萘夫西林鈉原料藥（批號(hào)：20080203、20080804,，純度：90％）,、注射用萘夫西林鈉（即萘夫西林鈉注射用無(wú)菌粉末，批號(hào)：20080401,、20080903,，規(guī)格：每瓶1.0g）均由華藥集團(tuán)山西博康藥業(yè)有限公司提供；萘夫西林鈉USP對(duì)照品（美國(guó)藥典會(huì)提供,，批號(hào)：10G229,，含量：90.1％）；萘夫西林鈉工作對(duì)照品（河北省藥品檢驗(yàn)所標(biāo)定,，批號(hào)：20081115,，含量：90.0％）；醋酸鈉為分析純,，乙腈為色譜純,。

2方法與結(jié)果2.1溶液的制備2.1.1含量測(cè)定用溶液。取萘夫西林鈉原料藥或注射用無(wú)菌粉末適量,，精密稱(chēng)定,，加水溶解并稀釋制成每1mL中含0.2mg的溶液，作為供試品溶液a,；另取萘夫西林鈉工作對(duì)照品適量,，同法制備，作為對(duì)照品溶液,。

2.1.2有關(guān)物質(zhì)測(cè)定用溶液,。取萘夫西林鈉原料藥或注射用無(wú)菌粉末適量，精密稱(chēng)定,，加水溶解并稀釋制成每1mL中含1.0mg的溶液,，作為供試品溶液b；精密量取1mL,，置于100mL容量瓶中,，加水稀釋至刻度,，搖勻，作為對(duì)照溶液,。

2.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：PhenomenexGeminiC18（150mm×4.6mm，5μm）,、依利特SinoChromC18（150mm×4.6mm,，5μm）；流動(dòng)相：0.05mol,？L－1醋酸鈉溶液（用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值至7.5）-乙腈（75∶25）,；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣量：10μL.

取0.2mgmL－1的萘夫西林鈉對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)試,，按萘夫西林峰計(jì)算理論板數(shù)為3400,，拖尾因子為0.97.溶劑（水）、對(duì)照品溶液,、由萘夫西林鈉原料藥制備成的供試品溶液a,、b的色譜結(jié)果詳。

2.3線(xiàn)性關(guān)系考察精密稱(chēng)取萘夫西林鈉工作對(duì)照品適量,，用水溶解并稀釋制成含萘夫西林0.038,、0.057、0.095,、0.19,、0.38、0.76,、1.14mg,？

mL－1的系列濃度溶液，分別取10μL進(jìn)樣測(cè)定,，以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果,，回歸方程：Y＝7.915×107X－6.291×103（r＝0.9999）,，萘夫西林檢測(cè)濃度線(xiàn)性范圍為0.04～1.14mgmL－1。

2.4專(zhuān)屬性考察對(duì)原料藥分別進(jìn)行酸,、堿,、熱、光,、氧化破壞試驗(yàn),，以獲得降解產(chǎn)物，考察其與主峰的分離情況,，結(jié)果降解產(chǎn)物峰與主峰分離完全,，雜質(zhì)峰之間亦有較好的分離,。

2.5回收率試驗(yàn)分別精密稱(chēng)取注射用無(wú)菌粉末20、25,、30mg各3份,，置于250mL容量瓶中，精密加入等量的萘夫西林鈉工作對(duì)照品,，加水溶解并稀釋至刻度,，制成含量測(cè)定濃度80％、100％,、120％的溶液,，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定,。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率,。可見(jiàn),，萘夫西林的平均回收率為99.5％,，RSD＝0.60％（n＝9），表明方法準(zhǔn)確度良好,。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批供試品,，重復(fù)取樣6次，依法測(cè)定其含量,，結(jié)果含量的RSD＝0.44％,，表明方法重復(fù)性好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱(chēng)取萘夫西林鈉原料藥20mg,，置于100mL容量瓶中,，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻,，在室溫下放置0,、2、4,、6,、8h后進(jìn)樣，測(cè)定峰面積,；同時(shí)與以枸櫞酸溶液（pH7.0）為溶劑制備的樣品溶液對(duì)比,。結(jié)果2種溶劑制備的樣品溶液8h峰面積的RSD分別為0.32％、0.13％,，表明2種溶液均比較穩(wěn)定,。

2.8檢測(cè)限測(cè)定取萘夫西林鈉工作對(duì)照品適量，用水溶解并稀釋制成系列濃度的溶液進(jìn)樣,，記錄色譜圖,。以信噪比S/N為3時(shí),，注入儀器的量確定萘夫西林的檢測(cè)限為2ng.

2.9重現(xiàn)性考察不同實(shí)驗(yàn)室分別采用不同型號(hào)HPLC儀及不同廠牌色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果主峰與相鄰雜質(zhì)峰均分離完全,，含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果基本一致,。

2.10樣品測(cè)定2.10.1主藥含量測(cè)定。取原料藥及注射用無(wú)菌粉末各2批,，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備,，取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖,。按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn),。

2.10.2有關(guān)物質(zhì)測(cè)定,。取原料藥及注射用無(wú)菌粉末制劑各2批，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備,，取供試品溶液和對(duì)照溶液各10μL注入液相色譜儀,，記錄色譜至主成分峰保留時(shí)間的4倍。

按不加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)總和,。

3討論本文參考USP30版中萘夫西林鈉原料藥及其注射用無(wú)菌粉末的含量測(cè)定方法,，以0.05mol？L－1醋酸鈉溶液（用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值為7.5）-乙腈為流動(dòng)相,，并對(duì)流動(dòng)相比例,、溶劑、檢測(cè)波長(zhǎng),、測(cè)定濃度進(jìn)行了選擇,。

3.1流動(dòng)相比例的調(diào)整為保證主峰與可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰的分離以及雜質(zhì)峰之間的分離，將乙腈比例由30％降為25％,，結(jié)果各物質(zhì)分離較好,。

3.2溶劑的選擇USP30版采用枸櫞酸溶液（pH7.0）作為溶劑，本法擬用水作為溶劑,。經(jīng)過(guò)對(duì)2種溶液的8h穩(wěn)定性進(jìn)行考察,，結(jié)果表明二者均比較穩(wěn)定，故選用經(jīng)濟(jì)易得,，溶解性,、穩(wěn)定性均能滿(mǎn)足分析要求的水作為溶劑。

3.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取萘夫西林鈉工作對(duì)照品,，用水溶解并稀釋成適當(dāng)濃度,，在200～350nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果萘夫西林鈉在227nm波長(zhǎng)處有最大吸收,，USP30版采用的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm接近吸收谷,，而筆者的研究發(fā)現(xiàn)萘夫西林鈉在227nm波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)較254nm波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)高10余倍,；取熱、酸,、堿,、光、氧化破壞的樣品溶液分別進(jìn)樣,，用二極管陣列檢測(cè)器（DAD）檢測(cè)主要有關(guān)物質(zhì)的光譜特征,，結(jié)果主要降解產(chǎn)物分別在224～229nm波長(zhǎng)處有最大吸收。因此在230nm波長(zhǎng)處主藥及有關(guān)物質(zhì)均有較高檢測(cè)靈敏度,，可作為含量及有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng),。

3.4測(cè)定濃度的選擇根據(jù)色譜峰響應(yīng)的線(xiàn)性范圍以及為了微量雜質(zhì)的有效檢出，筆者擬定主藥含量和有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定濃度分別為0.2,、1.0mg,？mL－1，進(jìn)樣量為10μL.

3.5記錄時(shí)間的選擇降解產(chǎn)物中強(qiáng)保留成分的出峰時(shí)間約為主峰保留時(shí)間的3.5倍,，故確定有關(guān)物質(zhì)色譜記錄時(shí)間為主峰保留時(shí)間的4倍,。